PRAKTIKUM BIOLOGI

RANCANGAN KULTUR JARINGAN WORTEL

A.Pengertian Kultur Jaringan

Kultur jaringan dalam bahasa asing disebut sebagai tissue culture. Kultur adalah budidaya dan jaringan adalah sekelompok sel yang mempunyai bentuk dan fungsi yang sama. jadi, kultur jaringan berarti membudidayakan suatu jaringan tanaman menjadi tanaman kecil yang mempunyai sifat seperti induknya.Kultur jaringan akan lebih besar presentase keberhasilannya bila menggunakan jaringan meristem. Jaringan meristem adalah jaringan muda, yaitu jaringan yang terdiri dari sel-sel yang selalu membelah, dinding tipis, plasmanya penuh dan vakuolanya kecil-kecil. Kebanyakan orang menggunakan jaringan ini untuk tissue culture. Sebab, jaringan meristem keadaannya selalu membelah, sehingga diperkirakan mempunyai zat hormon yang mengatur pembelahan.

Kultur jaringan merupakan salah satu cara perbanyakan tanaman secara vegetatif. Kultur jaringan merupakan teknik perbanyakan tanaman dengan cara mengisolasi bagian tanaman seperti daun, mata tunas, serta menumbuhkan bagian-bagian tersebut dalam media buatan secara aseptik yang kaya nutrisi dan zat pengatur tumbuh dalam wadah tertutup yang tembus cahaya sehingga bagian tanaman dapat memperbanyak diri dan bergenerasi menjadi tanaman lengkap. Prinsip utama dari teknik kultur jaringan adalah perbayakan tanaman dengan menggunakan bagian vegetatif tanaman menggunakan media buatan yang dilakukan di tempat steril.

Metode kultur jaringan dikembangkan untuk membantu memperbanyak tanaman, khususnya untuk tanaman yang sulit dikembangbiakkan secara generatif. Bibit yang dihasilkan dari kultur jaringan mempunyai beberapa keunggulan, antara lain: mempunyai sifat yang identik dengan induknya, dapat diperbanyak dalam jumlah yang besar sehingga tidak terlalu membutuhkan tempat yang luas, mampu menghasilkan bibit dengan jumlah besar dalam waktwu yang singkat, kesehatan dan mutu bibit lebih terjamin, kecepatan tumbuh bibit lebih cepat dibandingkan dengan perbanyakan konvensional.

B. Sifat Totipotensi

  Teknik kultur jaringan memanfaatkan prinsip perbanyakan tumbuhan secara vegetatif.  Berbeda dari teknik perbanyakan tumbuhan secara konvensional, teknik kultur jaringan dilakukan dalam kondisi aseptik di dalam botol kultur dengan medium dan kondisi tertentu. Karena itu teknik ini sering kali disebut kultur in vitro. Dikatakan in vitro (bahasa Latin), berarti "di dalam kaca" karena jaringan tersebut dibiakkan di dalam botol kultur dengan medium dan kondisi tertentu.  Teori dasar dari kultur in vitro ini adalah Totipotensi. Teori ini mempercayai bahwa setiap bagian tanaman dapat berkembang biak karena seluruh bagian tanaman terdiri atas jaringan-jaringan hidup. Oleh karena itu, semua organisme baru yang berhasil ditumbuhkan akan memiliki sifat yang sama persis dengan induknya.

C. Sterilisasi Alat dan Bahan

1. Alat

a. Laminar air flow

b. Alat diseksi

c. Cawan petri

d. Erlenmeyer ukuran 250 ml dan 500 ml

e. Lampu bunsen

2. Bahan

a.    Akar/umbi wortel

b.    Larutan alkohol 70%

c.    Larutan sunclin/bayclin 20%

d.   Akuades steril

e.    Kertas saring steril

f.     Media induksi kalus MS + 0.1 mg/l 2,4-D

D. Median ( Nutrien )

Media merupakan faktor penentu dalam perbanyakan dengan kultur jaringan. Komposisi media yang digunakan tergantung dengan jenis tanaman yang akan diperbanyak. Media yang digunakan biasanya terdiri dari garam mineral, vitamin, dan hormon. Selain itu, diperlukan juga bahan tambahan seperti agar, gula, dan lain-lain. Zat pengatur tumbuh (hormon) yang ditambahkan juga bervariasi, baik jenisnya maupun jumlahnya, tergantung dengan tujuan dari kultur jaringan yang dilakukan. Media yang sudah jadi ditempatkan pada tabung reaksi atau botol-botol kaca. Media yang digunakan juga harus disterilkan dengan cara memanaskannya dengan autoklaf.         

E. Prosedur Kerja

1. Akar wortel yang tidak cacat dicuci dalam air mengalir untuk

    menghilangkan kotoran pada permukaan akar.

2. Potong kedua bagian ujungnya, buat potongan akar menjadi ukuran 6-10 cm

     lalu masukkan ke dalam erlenmeyer.

3. Di dalam laminar air flow, rendam potongan akar tersebut dengan larutan

    alkohol 70% selama 5 menit sambil dikocok.

4. Buang larutan alkohol dan bilas dengan akuades steril. Kemudian masukkan

larutan sunclin atau bayclin 20%. Rendam selama 15-25 menit sambil

dikocok.
5. Buang larutan sunclin/bayclin, kemudian bilas dengan akuades steril 3-5

kali.
6. Dengan menggunakan pinset, angkat potongan akar dan simpan di atas

cawan petri yang diberi alas kertas saring steril.

7. Potong melintang akar setebal 3-5 mm, kemudian buat potongan eksplan ± 5

x 5 mm. Pastikan jaringan kambium (bagian dalam akar) menjadi bagian

potongan eksplan.

8. Pindahkan/tanam eksplan tersebut pada media induksi kalus yang sudah

    disiapkan. Setiap botol kultur berisi 4 potongan eksplan.

9. Tutup botol dengan rapat dan simpan diruang inkubasi dalam keadaan gelap.
10. Amati perkembangannya setiap minggu, selama 4-6 minggu.